催產(chǎn)素檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）ELISA操作原理

德國進(jìn)口DRG

【檢測原理】 

在執(zhí)行此測定之前，請閱讀完整的試劑盒說明書。提供催產(chǎn)素標(biāo)準(zhǔn)品以生成測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線，所有樣品應(yīng) 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出。 將標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋的樣品加入到包被有抗體的微孔板中，以捕獲兔抗體。將催產(chǎn)素-過氧化物酶聯(lián)物添加到標(biāo) 準(zhǔn)品和樣品的孔中。通過向每個(gè)孔中添加催產(chǎn)素多克隆抗體來啟動(dòng)結(jié)合反應(yīng)。在 4°C 孵育過夜后，洗滌微 孔并添加提供的底物。底物與結(jié)合的催產(chǎn)素-過氧化物酶結(jié)合物反應(yīng)。孵育 30 分鐘后，停止反應(yīng)，并在能 夠測量 450 nm 波長的酶標(biāo)儀中檢測所產(chǎn)生顏色的強(qiáng)度。 使用大多數(shù)酶標(biāo)儀提供的軟件對樣品的稀釋液進(jìn)行適當(dāng)校正后，可以計(jì)算出樣品中催產(chǎn)素的濃度。

所需但未提供的其他材料

1. 蒸餾水或去離子水 2. 聚丙烯或玻璃管 3. Speedvac /離心濃縮器或 N 2氣體和瓦斯集合管進(jìn)行蒸發(fā) 4. 帶有一次性吸頭的移液器，例如 Eppendorf 移液槍，可精確分配 25 µL，50 µL 和 100 µL 5. 微孔板振蕩器 6. 450 nm 酶標(biāo)儀 7. 四參數(shù)對數(shù)曲線（4PLC）擬合的軟件 

【儲存條件】 試劑盒在 4°C 下可保存至效期結(jié)束。 

【樣本類型】 該測定方法已經(jīng)過血清，EDTA 和肝素血漿，唾液，澄清牛奶和組織培養(yǎng)樣品的驗(yàn)證。 使用前，應(yīng)將含有可見顆粒物的樣品離心。

催產(chǎn)素在所有物種中都是相同的，我們希望該試劑盒可以檢測人類以外來源的催產(chǎn)素。 由于與魚神經(jīng)葉激素和中催產(chǎn)素的交叉反應(yīng)性，該試劑盒還應(yīng)能夠測量鳥類，魚類，兩棲動(dòng)物和爬行動(dòng)物 中的魚神經(jīng)葉激素。最終用戶應(yīng)評估其他被測樣品中催產(chǎn)素的回收率。

【樣品制備】 血清和血漿樣本 在試劑盒中檢測之前，應(yīng)使用提供的提取液或固相 C18 柱提取方案（應(yīng)要求提供肽/蛋白質(zhì)提取方案）提 取血清和血漿樣品。 

使用提取液的方案： 1. 將 1 份樣品與 1.5 份提取液混合。

2. 然后在室溫下渦旋振蕩 90 分鐘。

3. 在 4°C 下以 1660 x g 離心 20 分鐘。 

4. 將上清液轉(zhuǎn)移到透明管中。 

5. 將上清液在 37℃下干燥濃縮。 

6. 用 250 µL 分析緩沖液復(fù)溶樣品。

唾液樣本 唾液樣本應(yīng)使用血清和血漿樣本所述的提取試劑進(jìn)行提取。唾液應(yīng)與 Sarstedt 唾液采集管一起收集，提取， 干燥并在 250 µL 的分析緩沖液中重新配制。 

牛奶樣本 牛奶樣品應(yīng)通過以 10,000×g 離心 15 分鐘來澄清。刺穿頂部脂肪層并收集上清液。重復(fù)離心和收集兩次。 然后，在用于測定之前，必須使用提供的分析緩沖液將收集的上清液稀釋≥1:10。 澄清的牛奶樣品，即上清液，可以在-20℃下保存直至需要。

在制備后的 2 小時(shí)內(nèi)使用所有樣品

【試劑準(zhǔn)備】 使所有試劑平衡至室溫 30 分鐘。在將其運(yùn)用于試劑盒之前，請確保所有樣品均已達(dá)到室溫并已適當(dāng)稀釋。 

分析緩沖液 將一份濃縮液添加到四份去離子水中來稀釋分析緩沖液濃縮液 1：5。稀釋后，可在 4°C 下穩(wěn)定 3 個(gè)月。 洗滌緩沖液 將一部分濃縮液添加到 19 份去離子水中來稀釋洗滌緩沖液濃縮液 1:20。稀釋后，在室溫下穩(wěn)定 3 個(gè)月。

標(biāo)準(zhǔn)品制備 將試管標(biāo)記為＃1 至＃8。 吸取 450 µL 分析緩沖液至＃1 試管中，然后吸取 300 µL 至其余試管中。 催產(chǎn)素原液包含有機(jī)溶劑。將移液器吸頭預(yù)沖洗幾次，以確保準(zhǔn)確遞送。 小心地將 50 µL 催產(chǎn)素原液加入 1 號試管中，并*渦旋。然后再加入 200 µL 1 號管液至 2 號試管中并完 全渦旋。重復(fù)＃3 至＃8 試管的系列稀釋。 試管 1 至 8 中催產(chǎn)素的濃度將為 10,000、4,000、1,600、640、256、102.4、40.96 和 16.38 pg / mL。